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腦立體定位儀技術與大小鼠實驗具體操作方法

時間:2023-12-18 08:39:27 點擊次數:

腦立體定位儀技術與大小鼠實驗具體操作方法

實驗原理   

        腦立體定位技術被廣泛的運用于腦的損毀、刺激和腦電記錄的精確定位中,成為研究腦結構和功能必不可少的工具。腦立體定位技術主要是使用腦立體定位儀作為定位儀器,利用某些顱骨外面的標志(如前囟、后囟、外耳道、眼眶、矢狀縫等)或其它參考點所規定的三度坐標系統,來確定皮層下某些神經結構的位置,以便在非直視暴露下對其進行定向的刺激、破壞、注射藥物、引導電位等研究,是神經解剖、神經生理、神經藥理和神經外科等領域內的重要研究方法。常用的實驗動物,如大鼠、小鼠、貓等高等哺乳動物以及鳥類,其均有完全的外耳道,可用(耳棒)來定位。在確定了顱外標記之后,就可按腦立體定位圖譜所提供的數據進行定位操作。實驗器材腦立體定位儀,MC-5微操作儀,常規手術器械,鉆孔針,紗布,干棉球,酒精,0.4%戊巴比妥鈉(麻醉劑,現配現用),生理鹽水,1ml注射器,3%雙氧水, 小白鼠。


實驗步驟

小鼠腦定位的系統大致分兩種:

(1) 用耳間線中心定位,首先將兩個耳棒尖端在定位儀滑道中間部位彼此相接觸(兩個耳棒讀數相同),旋緊鏍絲。然后取下一側耳棒,另一耳棒不動。調節移動推進器,使校驗電極尖端與耳棒尖端的中心點相觸,即為A點(即耳間線中心點),并記下刻度值。然后,將推進器水平移動到門齒鉤的上方,將門齒鉤平面與校驗電極尖端相觸。這時就定出外耳道中心點與門齒牙板上面上沿之間的水平切面0點,記為H0。這時,動物的前囟和后囟基本處在一個水平面上,相差0-0.1mm。另外,規定耳間線中心點以上為+,向下為-;向嘴側為+,向尾側為-。

(2)用顱骨標志定位(常用前囟),即以前囟為嘴尾側0點,由前囟向嘴側為+,向尾側為-,其它與上面定位方法相同。


 實驗內容 

(1)動物麻醉:小鼠,體重20-30g,稱重后以0.4%戊巴比妥鈉腹腔麻醉注射時必須緩慢,隨時注意動物狀態。

(2)小鼠頭部固定:將小鼠的門齒固定于腦定位儀上頜固定器,然后把一側的耳捧推入動物的外道后,使動物的頭在處于兩滑道正中。再將另一耳捧推入另一側的外耳道。這時觀察兩個耳棒的刻度一致后,將兩耳棒上的固定螺絲扭緊,在將牙齒固定器上壓鼻環 2 壓下后扭緊(鼻環、耳棒的松緊度調節適宜為好),這時從各個方向推壓動物頭部"均不會出現移動。

(3)開顱鉆孔前的備皮:剪去動物頭部毛,用2%碘酒及75%酒精棉球作頭部皮膚的消毒,沿矢狀縫作一3cm長的皮膚切口,分離皮下組織,用雙氧水清潔顱骨表面的筋膜及肌肉并剝離,推開骨膜,暴露前囟、人字縫及矢狀縫。

(4)確定標準中線:將金屬定位針向下移動到矢狀縫上方后,再前后移動定位針,使定位針定位到前囟。

(5)小鼠海馬定位:用定位針在前囟后2mm, 矢狀縫旁開2.5mm處定位一點,即為海馬的平面位置,然后在此點上用鉆孔針在顱骨上鉆一小圓孔。

(6)注射藥物:小鼠海馬則位于該圓孔下2 mm,將1ml注射器吸入藥物安置到MC-5微操作儀上,操作儀器使注射器針頭由小鼠腦鉆孔處下降2mm時完成藥物注射到小鼠腦海馬處。

(7)制作腦組織切片:將小鼠腦制作成切片,顯微觀察小鼠腦中紅染料位置來驗證小鼠腦海馬定位是否準確

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